İnsan Korpus Kavernozum Hücre Kültürü Oluşturulması

Abstract

AMAÇ Bu çalışmanın amacı, erektil fonksiyonun anlaşılmasına ışık tutacak insan korpus kavernozumundan düz kas hücre ve endotel hücrelerinden oluşan hücre kültürü modelinin oluşturulması ve endotel hücre varlığının gösterilmesidir. YÖNTEM Erektil Disfonksiyon nedeniyle penil protez takılması planlanan yaşları 54- 65 arasında değişen 8 hastanın korpus kavernozum dokuları alınarak farklı yöntem ve tekniklerle korpus kavernozum hücre kültürü elde edildi. Hücrelerin, homojenite, canlılık, çoğalabilme ve morfolojik özellikleri değerlendirildi. RT-PCR ile endotel kaynaklı protein olan ABCA1 ve kaveolin varlığı ile İmmünhistokimyasal olarak endotel hücre varlığı araştırıldı. BULGULAR RT-PCR ile endotel kaynaklı molekül olan ABCA1 ve kaveolin gösterildi. İmmünhistokimyasal boyama yöntemi ile von Willebrand faktör kullanılarak endotel hücrelerinin varlığı gösterildi. Korpus kavernozum hücre kültüründe, elastaz ve EMB kullanımı ile en iyi metod elde edildi. SONUÇ Erişkin insan korpus kavernozum hücre kültürü enzimatik izolasyon yöntemi ile oluşturuldu. Bu çalışmayla oluşturulan hücre kültür protokolü insan korpus kavernozum hücre kültürleri ile yapılacak bilimsel çalışmalar için iyi bir modeldir. Anahtar kelimeler: Korpus kavernozum penis, erektil disfonksiyon, hücre kültürü, kaveolin, ABCA1 OBJECTIVE The aim of this study is to form a primary tissue culture by producing endothelial and smooth muscle cell cultures from adult human corpus cavernosum and to search for the most appropriate method for this purpose. METHODS The tissues for the primary corpus cavernosum cell culture were obtained from 8 patients aged between 54- 65 years old who have undergone penile prosthesis implantation because of erectile dysfunction during the procedure. Many methods have been tried during the cell culture study protocols. Cells were evaluated according to their homogeneity, viability, reproducibility and morphology. While morphological inspections were carried out by confocal microscope. RT-PCR was performed to evaluate the presence of endothelial molecules such as ABCA1 and caveolin and immunocytochemistry staining was done for the determination of endothelial cells. RESULTS We observed that using elastase and EBM was the best way for obtaining cavernosal endothelial cells from the whole tissue. ABCA1 and caveolin mRNA expressions were determined by RT-PCR and endothelial cells were visible by immunocytochemistry staining. CONCLUSION Adult human corpus cavernosum cell culture was formed by enzymatic isolation methods. The cell culture protocol in the present study is a good and practical method for future scientific research with adult human corpus cavernosum cell cultures. Keywords: Corpus cavernosum, penis, erectile dysfunction, cell culture, Caveolin, ABCA1