İnsan granüloza hücrelerinde apopitozun değerlendirilmesi

Abstract

Çalışmamızda yardımlı üreme teknikleri sikluslarında follikül aspirayonuyla elde edilen granüloza hücrelerindeki apopitoz oranlarının immunohistokimyasal ve ultrastrüktürel incelemesi ve folliküler sıvılarda ROS düzeylerinin karşılaştırılması amaçlanmaktadır. Çalışmamız prospektif klinik gözlemsel bir çalışmadır. Dokuz Eylül Üniversitesi Kadın Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı, Tüp Bebek Merkezi'ne çocuk sahibi olamama şikayeti ile müracaat eden primer yada sekonder infertil tanısına ek olarak PCOS, erkek faktör ve açıklanamayan infertilite tanısı konan ve yardımla üreme tekniği siklusuna alınan 30 hasta katıldı. Bütün olgulardan toplanan folliküler sıvılarındaki ROS spektrofotometrik yöntemle incelendi, ışık mikroskopu değerlendirmesi ile granüloza hücrelerindeki TUNEL pozitif hücre insidansı değerlendirildi ve aynı zamanda granüloza hücrelerinde meydana gelebilecek organel düzeyindeki değişiklikler Transmisyon Elektron Mikroskobu ile incelendi. Çalışmamızda granüloza hücrelerindeki ışık mikroskopi değerlendirmesi sonucunda açıklanamayan infertil grubunda TUNEL pozitif hücre ortalaması PCOS ve erkek infertil gruplarına göre istatistiksel olarak anlamlı şekilde yüksek bulundu. Folliküler sıvı MDA düzeyleri açıklanamayan infertilite olgularında PCOS'lu olgulara ve erkek faktör grubuna göre yüksek olduğu tespit edildi. Folliküler sıvı GPx düzeylerinin ise PCOS'lu olgularda, açıklanamayan infertilite ve erkek faktör olgularına göre yüksek olduğu tespit edildi. Ancak gruplardaki folliküler sıvı MDA ve GPx seviyeleri arasındaki bu fark istatistiksel olarak anlamlı bulunamadı. Elektron mikroskopisi değerlendirmelerinde ise hem DNA fragmantasyonunun değerlendirildiği TUNEL testi sonuçları ile hem de folliküler sıvı MDA seviyelerinin değerlendirilmesi ile elde edilen sonuçlara paralel olarak ince yapı değişiklikleri gözlendi. Çalışmamızda TUNEL tekniği, oositi destekleyen granüloza hücrelerindeki DNA kırıklarının belirlenmesi ve böylece hücrelerin apopitotik yola girdiğinin gösterilmesi için kullanılmıştır. Buna ek olarak ultrastrüktürel olarak süreçteki dejenerasyon değerlendirilmiş ayrıca bu duruma follikül sıvısındaki oksidatif stresin etkisi de araştırılmıştır. Böylece çalışmamızda PCOS'lu olgularla açıklanamayan infertilite olgularının karşılaştırılması, bu 3 farklı teknik kullanılarak ilk kez değerlendirilmiştir. Anahtar kelimeler: Granüloza Hücresi, PCOS, Açıklanamayan İnfertilite, TUNEL, Apopitoz, Ultrastrüktür, ROS In this study, we wanted to investigate to compare the percentage of apopitosis in granulosa cells from follicular fluid use immunohistochemistry technique and ultrastructure of granulosa cells and also assessment for ROS respectively cycles in assisted reproductive technology. Our study was a prospective, nonrandomized clinical study. Dokuz Eylül University Institute of Health Sciences Ethic committee approved our application with 13 numbered decision at 19th March 2008 and also Dokuz Eylül University Ethics Committee of Clinic And Laboratory Researches, Faculty of Medicine, approved our application with 120 numbered and 28 March 2008. This study is a workshop comprising 31 IVF cycles which has applied to 11 PCOS infertile patients, 10 unexplaned infertile patients and 10 male factor infertil patients between April 2008 and December 2008, in Dokuz Eylul Unıversıty Faculty Of Medıcıne Department Of Obstetrıcs and Gynecology ,IVF Center. Follicular fluid from each follicle were separated to three groups after each case. TUNEL assay was used to detect of DNA fragmentation in granulosa cells, MDA assessment for ROS, GPx assessment for antioxidant enzyme respectively and apoptosis in granulosa cells was evaluated ultrastructurally by transmission electron microscopy. There was statistically significant difference the percentage of apopitotic cells in granulosa cells between PCOS and unexplaned infertility group. There was no statistically significant difference between the levels of MDA and GPx in follicular fluid in theree groups. With this work we have done, it was investigated immunohistochemistry and also ultrastructural apopitosis of granulosa cells which are promoting oocytes , besides the follicle fluid was investigated for the effects of oxidative stress in this situation. Consequently, in this study we broke fresh ground in PCOS and unexplaned patients for used theese 3 techniques. Keyword: Granulosa Cells, PCOS, Unexplaned Infertility, TUNEL, Apopitosis, ROS, Ultrastructure